热门试卷

解：（1）重组质粒上的目的基因若要表达，需要目的基因的首尾含有启动子和终止子．而SnaBⅠ、AvrⅡ识别的序列在启动子与终止子之间，只要在目的基因两侧A和B位置分别接上这两种序列，并用SnaBⅠ、AvrⅡ这两种内切酶对质粒和目的基因同时切割，便会各自出现相同的粘性末端，便于重组与表达，同时防止自身环化，因此在HBsAg基因两侧的A和B位置接上SnaBⅠ和AvrⅡ限制酶的识别序列．

（2）①用DNA连接酶将切割后的HBsAg基因和pPIC9K质粒连接成重组质粒；②导入大肠杆菌体内，目的是利用大肠杆菌无性繁殖速度，短时间内可获取大量的重组质粒．

（3）重组DNA的两侧分别是启动子和终止子，除BglⅡ外，其它限制酶会破坏含有启动子、终止子的目的基因．

（4）用DNA分子杂交技术检测是否导入目的基因．

（5）资料1显示，甲醇为该酵母菌的唯一碳源，同时诱导HBsAg基因表达．

（6）酵母菌为真核生物，细胞内具有对分泌蛋白加工的内质网和高尔基体等细胞器，细菌等原核生物，不具有内质网和高尔基体等细胞器．

故答案为：

（1）SnaBⅠAvrⅡ

（2）DNA连接酶　大量重组质粒　

（3）BglⅡ

（4）DNA分子杂交

（5）甲醇　

（6）加工（修饰）

解：（1）基因工程中，运载工具包括质粒、噬菌体及动植物病毒等，其中质粒是主要运载工具，化学本质是双链环状的DNA．

（2）胰蛋白酶可将组织块分散成单个细胞；动物细胞培养过程中需要一定的气体环境（95%氧气和5%二氧化碳），其中5%CO2的作用是维持培养基（液）的pH．

（3）要得到更多的卵（母）细胞需用促性腺激素对动物进行超数排卵处理；成熟卵（母）细胞在核移植前需要进行去核处理，以保证克隆后代的遗传性状主要来自于供体核．

（4）在胚胎移植时，可通过胚胎分割技术获得更多的胚胎．其生理基础是受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应；外来胚胎能和受体子宫建立组织联系．进行胚胎移植的优势是可以充分发挥雌性优良个体的繁殖潜能．

故答案为：

（1）质粒      DNA 

（2）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶 ）     维持培养基（液）的pH

（3）促性腺激素（或促滤泡素，孕马血清）   使卵（母）细胞成熟    去核

（4）胚胎分割     受体子宫对外来胚胎不发生排斥反应；外来胚胎能和受体子宫建立组织联系  

雌性优良个体的繁殖潜能

解：（1）人体糖尿病Ⅰ型的产生主要是由于胰岛B细胞受到损伤，胰岛素分泌不足引起的．

（2）质粒是小型环状DNA分子，DNA的复制特点就是半保留复制．

（3）基因在细胞中是选择性表达的，人的皮肤细胞的胰岛素基因未表达（或未转录），不能形成胰岛素mRNA，因此不能提取到．

（4）过程②由mRNA形成DNA，称为逆转录，需要的酶是逆转录酶．

（5）基因工程操作一般要经过A目的基因的获取、A示目的基因和B质粒的结合、C重组DNA分子导入D大肠杆菌、目的基因在大肠杆菌中表达与检测等四个步骤．

（6）上述人类胰岛素的合成是在大肠杆菌核糖体上进行的．大肠杆菌细胞内缺少对胰岛素进行加工的内质网、高尔基体等场所，因此合成的人类胰岛素没有活性．

故答案为：

（1）胰岛B 

（2）环状DNA分子      半保留复制

（3）不能　         皮肤细胞中的胰岛素基因未表达（或未转录），不能形成胰岛素mRNA

（4）逆转录           逆转录    

（5）A　                B            　C

（6）核糖体  没有，大肠杆菌细胞内缺少对胰岛素进行加工的内质网、高尔基体等场所

解：（1）当受体细胞为动物细胞时，导入目的基因的方法为显微注射法．基因的表达需要启动子，因此在基因表达载体中，人生长激素基因的首端必须含有启动子，其作用是能够被RNA聚合酶识别并结合从而启动转录过程．

（2）能产生单克隆抗体的细胞必须具备既能无限增殖，又能产生特异性抗体的能力，由图可知，给细胞Ⅱ导入无限增殖调控基因（prG）能产生单克隆抗体，可知细胞Ⅱ本身具备产生抗体的能力，故为浆细胞（效应B细胞）．

（3）将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，即在抗虫棉培育过程中，需将抗虫基因（Bt毒蛋白基因）插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用就可以使抗虫基因进入棉细胞．要检测抗虫基因是否翻译成Bt毒蛋白，应从抗虫棉中提取蛋白质，并用抗原-抗体杂交方法进行检测．

故答案为：

（1）显微注射法       启动子     RNA聚合酶

（2）B细胞（浆细胞）   无限增殖   产生特异性抗体

（3）T-DNA     抗原-抗体杂交

解：（1）图示过程为将发光水母的绿色荧光蛋白基因进行切割，然后与质粒重组后导入兔的体细胞中，再利用一定的技术培养为荧光克隆兔．可见，该过程中绿色荧光蛋白基因属于目的基因．

（2）RNA聚合酶的结合位点是启动子．

（3）上述过程中，导入目的基因的甲兔的成纤维细胞要经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞与乙兔的卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞，重组细胞经过早期胚胎培养到桑葚胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母兔子宫内，最后生成荧光克隆兔．其中涉及到的细胞水平现代生物技术主要有动物细胞培养、细胞核移植．

（4）②过程为筛选出具有目的基因的细胞，比较简便的方法为在细胞水平上筛选出能够发出绿色荧光的细胞．

（5）在细胞核移植过程中一般利用去核后的卵细胞作为受体，因为卵细胞中含有能使体细胞的核基因表达的物质，它的全能性大于体细胞．

（6）为了获得多个相同的克隆兔应采用胚胎分割移植技术，操作对象为发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚．

（7）性激素对下丘脑和垂体分泌相关的激素存在负反馈调节，因此为了从乙兔体内一次获得多个卵细胞，往往需要向乙兔体内注入的是促性腺激素，而不是性激素，原因是通过负反馈调节会抑制下丘脑和垂体的活动，从而导致相关激素分泌量下降，进而引起自身性激素分泌量减少，影响排卵．

故答案为：

（1）目的

（2）启动子

（3）动物细胞培养、细胞核移植、胚胎移植

（4）能否发出绿色荧光

（5）卵细胞中含有能使体细胞的核基因表达的物质（或卵细胞的全能性大于体细胞）

（6）胚胎分割移植     桑椹胚或囊胚

（7）负反馈

解：（1）为了获得更多的卵细胞，可以采用注射促性腺激素，让母牛超数排卵．

（2）在基因工程中，构建基因表达载体需要限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体等工具．将目的基因导入动物受体细胞常用显微注射法．

（3）动物组织中获得单个细胞的方法有胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理．

（4）从③到⑤过程中运用的生物技术有动物体细胞核移植和胚胎移植．

（5）由于遗传物质主要存在于细胞核中，所以⑥的遗传性状和荷斯坦奶牛最相似．由于只有雌性个体才能大量分泌乳汁，所以要实现⑥批量生产血清白蛋白，则要求③的性染色体是XX，利用该方法得到的动物叫做转基因克隆动物．

故答案为：

（1）用促性腺激素处理良种奶牛

（2）限制性核酸内切酶      DNA连接酶         载体　      显微注射法

（3）胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）

（4）动物体细胞核移植　    胚胎移植

（5）荷斯坦奶牛         XX

解：（1）基因组文库含有某种生物的全部基因；cDNA文库中只含有该种生物的部分基因．

（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从筛选中出所需的耐旱基因．

（3）由于植物乙的耐旱性低，因此将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物乙的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株．要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的表达产物，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的耐旱性是否得到提高．

（4）将目的基因导入微生物细胞时，常采用感受态细胞法，即用Ca2+处理微生物细胞，使其成为感受态细胞，更容易吸收周围环境中的DNA分子．（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3：1时，该比例符合杂合子（Aa）自交后代的结果，则可推测该耐旱基因（A）整合到了同源染色体的一条上．

（5）A、该题目属于蛋白质工程，已经获得该目的基因片段，不需要合成编码目的肽的DNA片段，A错误；

B、需要构建含目的肽的DNA片段的表达载体，但这不是第一步，B错误；

C、蛋白质工程的第一步是根据蛋白质的功能，设计P1氨基酸序列，从而推出其基因序列，C正确；

D、该基因表达产物为一种抗菌体和溶血性均较强的多肽P1，目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，而目的多肽是抗菌性强但溶血性弱，所以必需对其改造，保持其抗菌性强，抑制其溶血性，D错误．

故选：C．

故答案为：

（1）全部   部分  

（2）筛选

（3）乙  表达产物  耐旱性  

（4）同源染色体的一条上     

（5）C

解：（1）在此转基因工程中，目的基因是荧光素酶基因；图中所示的黏性末端都相同，但是由2种限制性核酸内切酶作用产生的，其中第一个和第三个是由一种限制酶切割产生的，另外两个是由另一种限制酶切割产生的．

（2）基因工程需要的工具酶包括限制性核酸内切酶、DNA连接酶等．

（3）作为基因工程的运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选；③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．故选：ABD．

（4）常用的运载体有质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒，由于受体细胞是大肠杆菌，因此可选用质粒和噬菌体的衍生物作为载体．故选：AC．

（5）将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca2+处理大肠杆菌，使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态（处于感受态细胞状态），有利于目的基因导入受体细胞．

（6）检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因，常用DNA分子杂交技术；检测目的基因是否表达出相应的蛋白质，常用抗原-抗体杂交技术．

故答案为：

（1）荧光素酶基因　  2

（2）DNA连接酶

（3）A、B、D

（4）A、C

（5）Ca2+　      使大肠杆菌细胞处于能够吸收周围DNA分子的状态（处于感受态细胞状态）

（6）DNA分子杂交　抗原-抗体杂交

解：（1）图中①DNA是以原胰岛素mRNA为模板，反转录形成单链DNA，在酶的作用下合成双链DNA，从而获得了所需要的胰岛素基因．

（2）图1中④常用CaCl2溶液（或Ca2+）处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，以利于基因表达载体进入大肠杆菌．构建的表达载体含有人胰岛素基因、终止子、标记基因及其启动子等，启动子的作用是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA（最终获得所需要的蛋白质）．

（3）采用蛋白质工程可以对胰岛素进行改造的思路是：确定蛋白质的功能→预期蛋白质的空间结构→推测应有的氨基酸序列→找到基因的碱基序列．

A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更符合人类的需要，A正确；

B．蛋白质工程是在分子水平上对基因分子直接进行操作，定向改变分子的结构，B错误；

C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子，C正确；

D．蛋白质工程是基因工程的延伸，又被称为第二代基因工程，D正确．

故选：B．

（4）为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，即分子杂交．为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成人胰岛素，常用抗原-抗体杂交技术．

（5）①SmaI酶会破坏目的基因和质粒的标记基因（抗性基因），因此图中构建重组质粒时不能使用SmaI酶切割．

②根据图中DNA片段两侧的黏性末端可知，左侧是用限制酶BamHI切割形成的，右侧是用限制酶HindⅢ切割形成的，这样可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化．

③如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体的DNA上．

故答案为：

（1）原胰岛素mRNA　 逆转录        

（2）CaCl2溶液（或Ca2+）   　终止子   标记基因

RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因转录出mRNA（最终获得所需要的蛋白质）

（3）预期蛋白质的空间结构     找到基因的碱基序列     B

（4）标记的胰岛素基因片段    抗原-抗体杂交

（5）①SmaI酶会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因

②含目的基因的外源DNA和质粒     

③TDNA　 染色体的DNA