- 生物技术实践
- 共590题
42．植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有CR的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈 。
为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了如下培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“－”表示无。
据表判断，培养基 （“能”或“不能”）用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是 ；配制培养基时，在各种成分都熔化后灭菌前，要进行的是 。实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是 。
正确答案
不能 液体培养基不能分离单菌落 调整pH值 防止造成环境污染
解析
据表判断，培养基为液体培养基，不能用于分离和鉴别纤维素分解菌；调整pH值应在熔化后与灭菌前。实验结束后，使用过的培养基不灭菌处理就倒掉，会造成环境污染。
考查方向
微生物的培养
解题思路
运用微生物的相关知识进行解题。
易错点
知识点记忆不清
知识点
33．回答下列微生物相关问题。
人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的利用价值。为了增强发酵效果，研究人员拟从牛胃中筛选出纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行研究。请回答下列问题：
在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 。
正确答案
培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果
解析
要分离培养形成单个菌落，必需将菌悬液稀释，涂布时滴加的菌液不能过多。
考查方向
本题考查了生命科学基础知识:基础实验的原理、步骤、现象和基本方法；微生物的营养；生命科学的基本概念。还考查了生命科学的思维能力:从图、表中获取有效信息。在近几年上海高考试题中出现频率很高。
易错点
1、“培养基的配方”写不全，不能根据具体的研究目的选择正确的碳源。
知识点
36. 回答下列微生物相关问题。
人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的利用价值。为了增强发酵效果，研究人员拟从牛胃中筛选出纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行研究。请回答下列问题：
纯化微生物培养时，可采用两种接种方法。下图为接种后微生物培养的效果图，那么，获得图A效果的接种方法是______________，图B效果的接种方法是_____________。
正确答案
稀释涂布平板法 平板划线法
解析
依据接种后微生物培养的效果图即可判断。
考查方向
本题考查了生命科学基础知识:基础实验的原理、步骤、现象和基本方法；微生物的营养；生命科学的基本概念。还考查了生命科学的思维能力:从图、表中获取有效信息。在近几年上海高考试题中出现频率很高。
易错点
1、“培养基的配方”写不全，不能根据具体的研究目的选择正确的碳源。
知识点
25.漆酶属于木质素降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是（ ） A.生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B.筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落C.在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化D.斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株
正确答案
BC
知识点
44.回答下列有关微生物和酶工程的问题。（10分）枯草芽孢杆菌盛产蛋白酶，后者在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值，且已大规模产业化应用。44. 在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水和_______________（用序号组合回答）。①淀粉②蛋白质③生长因子④葡萄糖⑤无机盐为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株(a~e)的分泌物提取液及无菌水（f） 的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面；在37℃恒温箱中放置2~3天，结果如图17.45. 大规模产业化首选的菌株是_______________；菌株b提取物周围没有形成明显清晰区的原因是_______________。 图18 显示枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程，通常需对发酵液在60~70℃保温一定时间，再制备酶制剂46.在60~70℃保温一定时间的作用是__。A.诱导蛋白酶的热稳 定B.有利于发挥蛋白酶的最佳活性C.裂解枯草芽孢杆菌细胞D.大幅度降低发酵液中其他酶的活性47. 枯草芽孢杆菌蛋白酶制备的合理工艺步骤应为_____(选择正确的序号并排序)。①过滤 ②干燥 ③破碎 ④浓缩
正确答案
44.①②③⑤/②③④⑤ 45.a ①不能合成蛋白酶或合成的蛋白酶量不足；②合成的蛋白酶不分泌或分泌量不足；③分泌的蛋白酶活性低 46.D 47.①④②
知识点
回答下列有关微生物和酶工程的问题。（10分）
枯草芽孢杆菌盛产蛋白酶，后者在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值，且已大规模产业化应用。
44. 在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水和_______________（用序号组合回答）。
①淀粉 ②蛋白质 ③生长因子 ④葡萄糖 ⑤无机盐
45.为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株(a~e)的分泌物提取液及无菌水（f） 的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面；在37℃恒温箱中放置2~3天，结果如图17.
大规模产业化首选的菌株是_______________；菌株b提取物周围没有形成明显清晰区的原因是_______________。
46. 图18 显示枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在60~70℃保温一定时间，再制备酶制剂。
在60~70℃保温一定时间的作用是__。
47. 枯草芽孢杆菌蛋白酶制备的合理工艺步骤应为_____(选择正确的序号并排序)。
①过滤 ②干燥 ③破碎 ④浓缩
正确答案
①②③⑤/ ②③④⑤
解析
淀粉和葡萄糖通常作为碳源，蛋白质通常作为氮源，所以①②③⑤或者②③④⑤正确。
考查方向
解题思路
通常培养基培养物质有碳源、氮源、水、无机盐、生长因子。
易错点
注意区分培养基物质。
正确答案
a, ①不能合成蛋白酶或合成的蛋白酶量不足；②合成的蛋白酶不分泌或分泌量不足；③分泌的蛋白酶活性低
解析
含某种高浓度蛋白质的平板培养基上透明圈越大，说明蛋白酶含量高。菌株b提取物周围没有形成明显清晰区，可能是蛋白酶的合成、分泌或活性问题。
考查方向
解题思路
对于不能合成蛋白酶的菌落周围不能出现透明圈，分泌蛋白酶越多透明圈越大。
易错点
分不清如何筛选。
正确答案
解析
据图18可知，60~70℃时其他酶活性很低，在60~70℃保温一定时间，可以大幅度降低发酵液中其他酶的活性。
考查方向
解题思路
观察图解蛋白酶与其他酶在不同温度下酶的活性不同。
易错点
分不清图解表达意图。
正确答案
①④②
解析
枯草芽孢杆菌蛋白酶可以分泌到细胞外，因此不需破碎过程，经过滤、浓缩、干燥程序即可。
考查方向
考查酶的制备相关知识。
解题思路
掌握酶制备的合理工艺。
易错点
分清分泌蛋白合成分泌过程。
44．植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。刚果红（CR溶液）可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有CR的培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的透明圈 。
为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了如下培养基（成分见下表）：注：“+”表示有，“－”表示无。
有同学在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落如图15。 图中降解纤维素能力最强的菌株是 。
正确答案
菌落1
解析
菌落1的降解圈最大，降解纤维素能力最强。
考查方向
微生物的培养
解题思路
运用微生物的相关知识进行解题。
易错点
知识点记忆不清
知识点
31．回答下列微生物相关问题。
人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的利用价值。为了增强发酵效果，研究人员拟从牛胃中筛选出纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行研究。请回答下列问题：
在样品稀释和涂布平板的步骤中，下列选项不需要的是（ ）
正确答案
解析
微生物培养基的配制与显微镜无关，微生物培养时形成的菌落肉眼可见。
考查方向
本题考查了生命科学基础知识:基础实验的原理、步骤、现象和基本方法；微生物的营养；生命科学的基本概念。还考查了生命科学的思维能力:从图、表中获取有效信息。在近几年上海高考试题中出现频率很高。
易错点
1、“培养基的配方”写不全，不能根据具体的研究目的选择正确的碳源。
知识点
58. 回答下列有关遗传信息传递与表达的问题。
纤维素分子因为分子量大，不能直接进入酵母细胞，并且酵母菌无法分解环境中的纤维素。为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，科学家欲将目的基因纤维素酶基因通过重组质粒导入酵母菌细胞。其所用质粒及其酶切位点如图甲，外源DNA上的纤维素酶基因及其酶切位点如图乙，根据要求回答以下问题：
将菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别置于以纤维素为唯一碳源的培养基上，其中菌株Ⅱ不能存活，原因是缺少_____________，导致_____________________________________。
正确答案
信号肽编码序列；所产生的纤维素酶无法分泌到细胞外，分解细胞外的纤维素，使得细胞无可利用的碳源。
解析
示意图可见，工程菌菌株Ⅱ可以合成纤维素酶，但是不能运输、分泌到细胞外，不能分解利用培养基中的纤维素；菌株Ⅲ、Ⅳ合成的纤维素酶可以分泌到细胞外，因为能利用培养基中的纤维素，因而能生长增殖。而菌株Ⅱ与菌株Ⅲ、Ⅳ区别正在于后者导入了信号肽编码序列。
易错点
1、混淆同种限制酶切割目的基因与不同种限制酶切割目的基因的区别。
知识点
32．回答下列微生物相关问题。
人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的利用价值。为了增强发酵效果，研究人员拟从牛胃中筛选出纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行研究。请回答下列问题：
为了培养上述菌株，选择的培养基配方是（ ）（多选）
正确答案
解析
要获得纤维素酶高产菌株，必需是固体培养基，加琼脂，要以纤维素为唯一碳源，此外，要添加氮源、无机盐和水。
考查方向
本题考查了生命科学基础知识:基础实验的原理、步骤、现象和基本方法；微生物的营养；生命科学的基本概念。还考查了生命科学的思维能力:从图、表中获取有效信息。在近几年上海高考试题中出现频率很高。
易错点
1、“培养基的配方”写不全，不能根据具体的研究目的选择正确的碳源。
知识点
25.漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是( )
正确答案
解析
生活污水中含有大量微生物，但不一定含有产漆酶的菌株，A错误；筛选生活污水中含有大量微生物，B正确；在涂布平板上长出的菌落，在通过划线进一步纯化，C正确；斜面培养基中含有大量营养物，可在低温下长期保存菌株，D错误。
考查方向
解题思路
微生物分离通常用选择固体培养基，纯化的方法通常有平板划线法和稀释涂布平板法。
易错点
注意分离和计数微生物所使用的接种方法不同。
知识点
下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
58.用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用______两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于__________________态的大肠杆菌。
59.为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_____________。
60.若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。
61.若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得 种大小不同的DNA片段。
正确答案
BclI和HindⅢ 连接 感受
解析
选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamHI可能使质粒中启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ。酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌。
考查方向
解题思路
不同限制酶识别的碱基序列不同，切割位点不同，但粘性末端可能相同。
易错点
注意保持基因结构的完整性。
正确答案
四环素 引物甲和引物丙
解析
为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素。PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链。
考查方向
解题思路
通过没有被破坏的标记基因进行筛选。
易错点
分清被破坏的抗性基因是否被破坏。
正确答案
解析
根据BamHI和Bcl I的酶切位点，BamHI酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为
考查方向
解题思路
根据BamHI和Bcl I的酶切位点，BamHI酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接。
易错点
分清不同限制酶识别的碱基序列和切出的粘性末端序列。
正确答案
7
解析
根据BamH 、Bcl I和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。
考查方向
解题思路
所有酶、一种酶等各种情况分别考虑即可。
易错点
注意是几种酶切的不同情况。
19. 做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是（ ）
正确答案
解析
高压灭菌加热结束时,打开放气阀使压力表指针回到零后,打开排气阀，再开启锅盖，A错误；倒平板时,应将打开的皿盖打开一缝隙,以免培养基溅到皿盖上，B错误；不能趁热挑取菌落，以免杀死微生物，C错误；用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上，D正确。
考查方向
解题思路
结合知识分析选项，作出判断
易错点
注意事项
知识点
人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃,可用来发酵处理秸秆,提高秸秆的营养价值。
为了增强发酵效果,研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株,并对其降解纤维素能力进行了研究。 请回答下列问题:
49.在样品稀释和涂布平板步骤中,下列选项不需要的是 (填序号)。
①酒精灯 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水
51.向试管内分装含琼脂的培养基时,若试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净的原因是 。
52.刚果红可以与纤维素形成红色复合物,但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。 研究人员在刚果红培养基平板上,筛到了几株有透明降解圈的菌落(见右图)。 图中降解圈大小与纤维素酶的有关。 图中降解纤维素能力最强的菌株是 (填图中序号)。
53.研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株 J1 和 J4,在不同温度和 pH 条件下进行发测得发酵液中酶活性的结果见下图,推测菌株 更适合用于人工瘤胃发酵,理是 。
正确答案
(1)③
解析
稀释涂布平板法中，培养基位于培养皿中，无菌水用于稀释，涂布在酒精灯火焰旁进行，以免杂菌污染，所以该过程不需要使用显微镜。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
材料
正确答案
(2)培养基表面的菌悬液会出现积液,导致菌体堆积,影响分离效果
解析
（2）若涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量过多，则会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
原因
正确答案
(3)避免培养基污染棉塞
解析
（3）若试管口粘附有培养基，则需用酒精棉球擦净，以免培养基污染棉塞。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
原因
正确答案
(4)量与活性 ①
解析
有透明降解菌说明纤维素被纤维素酶催化降解，则降解圈大小与纤维素酶的量与活性有关。降解圈越大，说明降解纤维素能力最强，由图可知，①菌落周围的降解圈最大，说明降解纤维素能力最强 。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
菌株的判断
正确答案
(5)J4 发酵过程会产热和产酸,J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高
解析
由于发酵过程中会产热和产酸，J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高，所以菌株J4更适合用于人工瘤胃发酵。
考查方向
解题思路
结合知识分析题干完成
易错点
原理
高中生物学实验中，以下操作对估测结果的数值准确性影响最大的一项是
正确答案
解析
略
知识点
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