- 土壤中分解尿素的微生物或细菌的分离与计数
- 共916题
（1）微生物的分布：能降解某种除草剂（一种难以降解的含氮有机物）的细菌主要分布在______的土壤中．
（2）微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用______和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用______法进行灭菌．
（3）微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生型______发酵产生酒精．
（4）微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是图示中A、B两种方法．常用来统计样品活菌数目的方法是[______]______．
（5）微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是______．
（6）微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应______；从物理性质来看，还应加入______．接种培养后，依据培养基中是否产生______来筛选能降解该除草剂的细菌．
正确答案
长期使用该除草剂
酒精
高压蒸汽灭菌
酵母菌
A
稀释涂布平板法
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
以该除草剂为唯一氮源
琼脂
透明圈
解析
解：（1）微生物的分布：纤维素分解菌主要分布长期使用该除草剂的土壤．
（2）微生物的消毒和灭菌：在菊花组织培养中，对外植体常用酒精和氯化汞进行消毒；在微生物培养中，对培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌．
（3）微生物的应用：在葡萄酒的自然发酵过程中，运用吸附在葡萄皮上的野生型酵母菌发酵产生酒精．
（4）微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法．
（5）微生物的计数：运用活菌计数法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落．
（6）微生物的鉴定：要从土壤样液中筛选出能降解该除草剂的细菌．设计培养基配方时，从用途来看，除加入必需的营养成分外，还应以该除草剂为唯一氮源；从物理性质来看，还应加入琼脂．接种培养后，依据培养基中是否产生透明圈来筛选能降解该除草剂的细菌．
故答案为：
（1）长期使用该除草剂
（2）酒精 高压蒸汽灭菌
（3）酵母菌
（4）A 稀释涂布平板法
（5）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落
（6）以该除草剂为唯一氮源 琼脂 透明圈
由于石油价格的不断上涨，替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等的开发备受世界关注，有人想利用玉米秸秆生产燃料酒精，其大致流程为：
（1）玉米秸秆预处理后，应该选用______进行水解，使之转化为发酵所需的葡萄糖．
（2）分离这种水解酶的野生菌株一般从土壤中筛选，所需要的培养基为______培养基，但现有的野生菌株对玉米秸秆的转化效率低，某同学尝试对其进行改造，以获得高效菌株．
实验步骤：
①配制______（固体、半固体、液体）培养基，该培养基的碳源应为______．
②将野生菌株接入已经用______法灭菌的培养基平板上．
③立即用适当剂量的紫外线照射，其目的是对野生菌株进行______．
④菌落形成后，加入______染液，观察菌落周围培养基的颜色变化和变化范围的大小，周围出现______（现象）的菌落即为初选菌落．
⑤分离、纯化菌种时为得到单菌落，常用______法接种．
（3）发酵阶段需要的菌种是酵母，生产酒精必须要控制的条件是______．
（4）生产的酒精易挥发但可溶于水，宜选用______的方法从酵母菌代谢产物中提取．
正确答案
纤维素酶
选择
固体
纤维素
高压蒸汽灭菌
诱变
刚果红
透明圈范围大
平板划线或稀释涂布平板
无氧（密封、密闭）
水蒸气蒸馏
解析
解：（1）玉米秸秆的主要成分是纤维素，根据酶的专一性原理，可用纤维素酶水解纤维素．
（2）分离纤维素分解菌的培养基时以纤维素为唯一碳源的培养基，属于选择培养基．
实验步骤：
①微生物的分离应该用固体培养基．
②培养基的灭菌方法只能使用高压蒸汽灭菌法．
③紫外线的作用是诱导DNA分子发生基因突变．
④刚果红可以和纤维结合形成红色复合物，纤维素分解菌将纤维素分解以后，红色复合物消失，会形成透明圈．
⑤接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法．
（3）酵母菌的无氧呼吸的产物是乙醇，需要在密闭条件下才能进行无氧呼吸．
（4）酵母菌的代谢产物中有机物很多，由于酒精容易挥发，经过蒸馏装置加热以后，酒精先挥发出来，然后除去其中的水分．
故答案为：
（1）纤维素酶
（2）选择
①固体 纤维素 ②高压蒸汽灭菌 ③诱变 ④刚果红 透明圈范围大 ⑤平板划线 稀释涂布平板
（3）无氧（密封、密闭）
（4）水蒸气蒸馏
请根据所学知识回答以下问题
（1）有2位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数．在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下2种统计结果：甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；乙同学在该浓度下涂布了3个平板统计的菌落数分别为21、212、256，并且取平均值163作为统计结果；请评价这两位同学的实验结果的有效性．
①甲同学______，原因是______．
②乙同学______，原因是______．
③稀释涂布平板法所用培养基按物理性质划分属于______培养基；微生物实验室培养一般用的______培养基作为空白对照以检验培养是否受杂菌污染．
（2）生物工程常需分离酵母菌和Taq耐热菌，分离方法常用选择培养基．例如用尿素为唯一氮源的适宜培养基，分离能分解尿素的细菌．请提出从含细菌、酵母菌和Taq耐热菌的培养液中分离酵母菌和Taq耐热菌的方案．
④分离酵母菌：______．
⑤分离Taq耐热菌：______．
⑥分离和培养Taq耐热菌的主要目的是为了从______中获得供PCR技术利用．
正确答案
解：（1）①甲同学实验操作不合理，原因是只涂布了一个平板，未设置对照组，没有设置重复组，结果不具有说服力．
②乙同学结果也不合理，因1个计数结果与另2个相差太远，不能简单的用其平均数．
③在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性．在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相当，结果差距太大，意味着操作有误，需要重新实验．
（2）④由于酵母菌为真菌，故可用加抗生素的选择培养基分离酵母菌．
⑤分离Taq耐热菌可根据该菌的特点用高温条件进行选择培养．
⑥分离和培养Taq耐热菌的主要目的是为了从中获得耐高温的热稳定DNA聚合酶，供PCR技术利用．
故答案为：
①不合理；没有设置重复组，结果不具有说服力．
②不合理；第一个计数结果误差过大，不应用作求平均值．
③固体 不接种
④用加抗生素的选择培养基分离酵母菌
⑤用高温培养条件分离Taq耐热菌
⑥热稳定DNA聚合酶
解析
解：（1）①甲同学实验操作不合理，原因是只涂布了一个平板，未设置对照组，没有设置重复组，结果不具有说服力．
②乙同学结果也不合理，因1个计数结果与另2个相差太远，不能简单的用其平均数．
③在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性．在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否相当，结果差距太大，意味着操作有误，需要重新实验．
（2）④由于酵母菌为真菌，故可用加抗生素的选择培养基分离酵母菌．
⑤分离Taq耐热菌可根据该菌的特点用高温条件进行选择培养．
⑥分离和培养Taq耐热菌的主要目的是为了从中获得耐高温的热稳定DNA聚合酶，供PCR技术利用．
故答案为：
①不合理；没有设置重复组，结果不具有说服力．
②不合理；第一个计数结果误差过大，不应用作求平均值．
③固体 不接种
④用加抗生素的选择培养基分离酵母菌
⑤用高温培养条件分离Taq耐热菌
⑥热稳定DNA聚合酶
某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难以降解的有机化合物A，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌（“目的菌”）．实验的主要步骤如下．请分析回答问题：
（1）培养基中加入化合物A的目的是筛选______，这种培养基属于______培养基．
（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的______，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是______．
（3）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量______的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量______．
（4）转为固体培养时，常采用______的方法接种，获得单菌落后继续筛选．
（5）实验结束时，使用过的培养基应该进行______处理后，才能倒掉．
正确答案
解：（1）培养基中加入化合物A是为分解化合物A的微生物提供碳源和氮源，分离出能分解化合物A的微生物；这中培养基从功能上分属于选择培养基．
（2）分析培养基的配方可知，该培养基由化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制而成，因此化合物A为目的菌提供了碳源和氮源；目的菌是需氧微生物，因此在培养过程中应该震荡培养，增加培养液中的溶氧量满足微生物对氧气的需求．
（3）由于“目的菌”有降解的有机化合物A的作用，所以培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量进一步增加．
（4）转为固体培养时，常采用平板划线法进行接种，分离获得单菌落．
（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，防止造成环境污染．
故答案为：
（1）“目的菌”选择
（2）化合物A 异养需氧型
（3）减少 增加
（4）平板划线
（5）灭菌
解析
解：（1）培养基中加入化合物A是为分解化合物A的微生物提供碳源和氮源，分离出能分解化合物A的微生物；这中培养基从功能上分属于选择培养基．
（2）分析培养基的配方可知，该培养基由化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制而成，因此化合物A为目的菌提供了碳源和氮源；目的菌是需氧微生物，因此在培养过程中应该震荡培养，增加培养液中的溶氧量满足微生物对氧气的需求．
（3）由于“目的菌”有降解的有机化合物A的作用，所以培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量进一步增加．
（4）转为固体培养时，常采用平板划线法进行接种，分离获得单菌落．
（5）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，防止造成环境污染．
故答案为：
（1）“目的菌”选择
（2）化合物A 异养需氧型
（3）减少 增加
（4）平板划线
（5）灭菌
微生物培养是微生物工程中的基础技术．下列相关叙述正确的一项（ ）
正确答案
解析
解：A、病毒不能在培养基上繁殖，必须在活细胞内才能生存，A错误；
B、在每次划线前后都必须灼烧接种环，B错误；
C、自养型微生物不需添加碳源，固氮菌不需添加氮源，C正确；
D、在培养的过程中，若没有杂菌污染，细胞数目不断地增加，种类不增加，D错误．
故选：C．
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