- 土壤中分解尿素的微生物或细菌的分离与计数
- 共916题
铜仁一中正在申报省级一类示范性高中，学校打算以学生为主体，教师协助的方式建立微生物实验室，以丰富学生的生命科学实验内容．请回答下列问题：
（1）对微生物实验室进行清扫和消毒处理，准备微生物培养所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种微生物菌种．对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备牛肉膏蛋白胨固体培养基，所需的原料除了牛肉膏和蛋白胨之外还需要______，牛肉膏和蛋白冻的作用是______．将配制好的培养基分装到三角瓶中，用两层牛皮纸扎紧瓶口后置于______中灭菌．
（2）实验室中需要的微生物也可以自己培养，方法为：取土壤1g溶解，用相应的培养基将土壤稀释液中的微生物进行分离纯化保留菌种即可．分离纯化时选用的培养基从功能上来说属于______培养基．
（2）由于微生物的营养类型复杂，不同的微生物对营养物质的需求是不同的．如果培养能进行光合作用的微生物，培养基中的不需要加入的是______源，如果培养能进行固氮作用的微生物，培养基中的不需要加入的是______源．
（3）饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用．若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等．如图示学生们从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程．
该过程中，微生物的接种方法是______，接种以前进行的一系列稀释操作，目的是在培养皿表面形成______．根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数就能大致推测出样品中的活菌数．如果一培养基上有3个菌落，则1g土壤中大致的活菌数量是______．由于植酸钙的不溶解性，使培养基形成白色浑浊．产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶．实验结果说明______．
正确答案
解：（1）培养基的成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，牛肉膏和蛋白胨可以提供碳源、氮源和生长因子，配置好的培养基应用高压蒸汽灭菌．
（2）培养基从功能来分有选择培养基和鉴别培养基，分离纯化时选用的培养基从功能上来说属于选择培养基．
（3）能进行光合作用的微生物能利用二氧化碳，故培养基中不加有机碳源，能进行固氮作用的微生物，能自身固氮，培养基中的不需要加入的是氮源．
（4）图示的接种方法为稀释涂布平板法，经过一系列稀释操作，目的是在培养皿表面形成由单个细菌繁殖而来的单个菌落，据此可以推测计算原来的活菌数，也可以用于菌种的提纯．1g土壤中大致的活菌数量是3÷0.1×10×10×10×100=3×106个．由于根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶，周围有透明区域的菌落可以产植酸酶，由图可以看出ACE菌落均能产生植酸酶，但E产生植酸酶的效果较好．
故答案为：（1）水、无机盐、琼脂 提供碳源、氮源（和生长因子） 高压蒸汽灭菌锅
（2）选择
（3）碳源 氮源
（4）稀释涂布平板法 单个菌落 3×106个 ACE菌落均能产生植酸酶，但E产生植酸酶的效果较好
解析
解：（1）培养基的成分一般包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，牛肉膏和蛋白胨可以提供碳源、氮源和生长因子，配置好的培养基应用高压蒸汽灭菌．
（2）培养基从功能来分有选择培养基和鉴别培养基，分离纯化时选用的培养基从功能上来说属于选择培养基．
（3）能进行光合作用的微生物能利用二氧化碳，故培养基中不加有机碳源，能进行固氮作用的微生物，能自身固氮，培养基中的不需要加入的是氮源．
（4）图示的接种方法为稀释涂布平板法，经过一系列稀释操作，目的是在培养皿表面形成由单个细菌繁殖而来的单个菌落，据此可以推测计算原来的活菌数，也可以用于菌种的提纯．1g土壤中大致的活菌数量是3÷0.1×10×10×10×100=3×106个．由于根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶，周围有透明区域的菌落可以产植酸酶，由图可以看出ACE菌落均能产生植酸酶，但E产生植酸酶的效果较好．
故答案为：（1）水、无机盐、琼脂 提供碳源、氮源（和生长因子） 高压蒸汽灭菌锅
（2）选择
（3）碳源 氮源
（4）稀释涂布平板法 单个菌落 3×106个 ACE菌落均能产生植酸酶，但E产生植酸酶的效果较好
有关稀释涂布平板法，叙述不合理的是（ ）
正确答案
解析
解：AB、采用稀释涂布平板法时，首先需将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，AB正确；
C、平板涂布后要将培养皿放在适宜的条件下培养，让菌体进行繁殖，C正确；
D、在不同稀释度的菌液接种后，只有在一定的稀释度的菌液里，聚集在一起的微生物才能分散成单个细胞，从而能够在培养基表面形成单个菌落；如果稀释度过低，将不会形成单个菌落；如果稀释度过高，可能没有菌落生成，D错误．
故选：D．
人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：
（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有______、______和______．
（2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养．在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在______旁进行操作．接种后的培养皿倒置于37℃的______中培养．
（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于______培养基．若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的______使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源．变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力______．
正确答案
高压蒸汽灭菌
灼烧灭菌
干热灭菌
酒精灯火焰旁
恒温箱
鉴别
氨
越强
解析
解：（1）常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌，灼烧灭菌，干热灭菌．
（2）为避免杂菌污染，操作要在酒精灯火焰旁操作，为防止水蒸气在皿盖上凝结会产生水滴，在恒温培养箱中培养皿需要倒置培养．
（3）酚红指示剂可用于鉴定尿素分解菌，故培养基为鉴别培养基；尿素被分解成氨可使PH呈碱性，变色区域越大，说明分解能力越强；以尿素为氮源的培养基中菌落数少，因为其他微生物不能在该环境中生存．
故答案为：
（1）高压蒸汽灭菌 灼烧灭菌 干热灭菌
（2）酒精灯火焰旁 恒温箱
（3）鉴别 氨 越强
下列关于微生物的培养和运用的叙述错误的是（ ）
正确答案
解析
解：A、消毒是能够杀灭物体表面和内部的病原菌营养体，但不一定能杀死细菌芽孢的方法，A正确；
B、在微生物的培养中，平板划线法可以分离菌种，但不能统计样品中活菌的数目，而稀释涂布平板法可用来统计样品中活菌的数目，B错误；
C、培养基的成分会根据培养动物、植物、微生物的不同而不同，C正确；
D、微生物的接种常采用平板划线法和稀释涂布法，D正确．
故选：B．
（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．在涂布接种前，随机取若干______后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目是______；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数为______．
（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过______灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是______．
（3）示意图A和B中，______表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果．
（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养．结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快．分析其原因是：振荡培养能提高培养液的______的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高______的利用率．
正确答案
解：（1）在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目是检测培养基平板灭菌是否合格．出每升水样中的活菌数为（39+38+37）÷3÷0.1×100×1000=3.8×107．
（2）对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是：将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的菌落．
（3）分析题图可知，A培养皿采用的接种方法是平板划线法，B培养皿采用的接种方法是稀释涂布平板法．
（4）由题意可知，振荡培养比静置培养的细菌生长速度快，由此可以说明该细菌是需要菌，由于振荡培养提高l培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，细菌生长速度加快．
故答案为：
（1）灭菌 检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×107
（2）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）B
（4）溶解氧 营养物质
解析
解：（1）在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目是检测培养基平板灭菌是否合格．出每升水样中的活菌数为（39+38+37）÷3÷0.1×100×1000=3.8×107．
（2）对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌；在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线的目的是：将聚集的菌体逐渐稀释分散以便获得由单个细胞繁殖而来的菌落．
（3）分析题图可知，A培养皿采用的接种方法是平板划线法，B培养皿采用的接种方法是稀释涂布平板法．
（4）由题意可知，振荡培养比静置培养的细菌生长速度快，由此可以说明该细菌是需要菌，由于振荡培养提高l培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，细菌生长速度加快．
故答案为：
（1）灭菌 检测培养基平板灭菌是否合格 3.8×107
（2）灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落
（3）B
（4）溶解氧 营养物质
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