- 多聚酶链式反应扩增DNA片段
- 共164题
RT-PCR是将mRNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式反应相结合的技术,具体过程如图所示,请回答:
(1)过程①需要加入缓冲液、原料、______、______ 和引物A等.
(2)过程②首先要将反应体系的温度升高到95℃,其目的是______,该反应体系中所用的TaqDNA聚合酶至少应能耐受______℃高温.
(3)决定RT-PCR扩增片段的是______,要对图中单链cDNA进行n次循环的扩增,理论上至少需要______个引物B.
(4)利用RT-PCR技术可用于对某些微量RNA病毒的检测,并可提高检测的灵敏度,原因是______.
(5)RT-PCR过程中主要通过对______的控制,影响酶的活性,从而使得化学反应高效有序地进行.
正确答案
解:(1)过程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的过程,表示逆转录,需要加入缓冲液、原料、RNA提取物、逆转录酶和引物A等.
(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95℃,其目的是让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开,该反应体系中所用的Taq酶至少应能耐受95℃高温.
(3)决定RT-PCR扩增片段的是引物;过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,根据DNA分子半保留复制特点可知,该过程理论上至少需要2n-1个引物B.
(4)利用RT-PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测时可提高检测的灵敏度,原因是增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度),便于检测.
(5)RT-PCR过程中主要借助对温度的控制,影响酶的活性,从而使得化学反应有序高效地进行.
故答案为:
(1)RNA提取物 逆转录酶
(2)让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开(答对一点即得分) 95℃
(3)引物 2n-1
(4)增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度),便于检测
(5)温度
解析
解:(1)过程Ⅰ是由mRNA形成cDNA的过程,表示逆转录,需要加入缓冲液、原料、RNA提取物、逆转录酶和引物A等.
(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95℃,其目的是让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开,该反应体系中所用的Taq酶至少应能耐受95℃高温.
(3)决定RT-PCR扩增片段的是引物;过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增,根据DNA分子半保留复制特点可知,该过程理论上至少需要2n-1个引物B.
(4)利用RT-PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测时可提高检测的灵敏度,原因是增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度),便于检测.
(5)RT-PCR过程中主要借助对温度的控制,影响酶的活性,从而使得化学反应有序高效地进行.
故答案为:
(1)RNA提取物 逆转录酶
(2)让逆转录酶变性失活、使mRNA-cDNA杂合双链解开(答对一点即得分) 95℃
(3)引物 2n-1
(4)增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度),便于检测
(5)温度
近10年来,PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室的一种常规手段,其原理是利用DNA半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如图),在很短的时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体.
(1)加热使DNA双链打开,这一步是打开______键,称为______,在细胞中是在______酶的作用下进行的.
(2)当温度降低时,引物与模板末端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA分子,此过程中的原料是______,遵循的原则是______.
(3)PCR技术的必需条件,除了模板、原料、酶以外,至少还要三个条件,即:液体环境、适宜的______和______.
(4)通过PCR技术使DNA分子大量复制,若将一个用15N标记的DNA分子放入试管中,以14N标记的脱氧核苷酸为原料,连续复制4次之后,则15N标记的脱氧核苷酸链占全部脱氧核苷酸链总数的比例为______.
正确答案
解:(1)加热使DNA双链打开,这一步是打开氢键,称为解旋,在细胞中是在解旋酶的作用下使此键断裂.
(2)当温度降低时,引物与模板3’端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA分子,此过程中加入四种脱氧核苷三磷酸作为原料,遵循的原则是碱基互补配对原则.
(3)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的温度和酸碱度.
(4)PCR技术利用了DNA复制的原理,由于DNA复制为半保留复制,因此连续复制4次之后,将产生24=16个子代DNA分子,32条链,中有两个DNA分子中各有一条链含有15N标记,因此15N标记的脱氧核苷酸链占全部脱氧核苷酸链总数的比例为=
.
故答案为:
(1)氢 解旋 解旋
(2)四种脱氧核苷三磷酸 碱基互补配对原则
(3)温度 酸碱度
(4)
解析
解:(1)加热使DNA双链打开,这一步是打开氢键,称为解旋,在细胞中是在解旋酶的作用下使此键断裂.
(2)当温度降低时,引物与模板3’端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA分子,此过程中加入四种脱氧核苷三磷酸作为原料,遵循的原则是碱基互补配对原则.
(3)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的温度和酸碱度.
(4)PCR技术利用了DNA复制的原理,由于DNA复制为半保留复制,因此连续复制4次之后,将产生24=16个子代DNA分子,32条链,中有两个DNA分子中各有一条链含有15N标记,因此15N标记的脱氧核苷酸链占全部脱氧核苷酸链总数的比例为=
.
故答案为:
(1)氢 解旋 解旋
(2)四种脱氧核苷三磷酸 碱基互补配对原则
(3)温度 酸碱度
(4)
近十年来,PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段,其原理是利用DNA半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如图),在很短的时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使实验所需要的遗传物质不再受限于活的生物体.
(1)PCR技术能把某一DNA片段进行扩增,依据的原理是:______
(2)加热使DNA双链打开,这一步是打开______键,称为______,在细胞中是在______的作用下使此键断裂.
(3)当温度降低时,引物与模板______端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA分子,此过程中加入四种脱氧核苷三磷酸的目的是______,遵循的原则是______.
(4)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的______和______.
(5)PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可分为______、______、______三个步骤.
正确答案
解:(1)PCR技术能把某一DNA片段进行扩增,依据的原理是:DNA分子具有双螺旋结构和DNA分子中碱基的互补配对.
(2)加热使DNA双链打开,这一步是打开氢键,称为解旋,在细胞中是在解旋酶的作用下使此键断裂.
(3)当温度降低时,引物与模板3’端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA分子,此过程中加入四种脱氧核苷三磷酸的目的是既是原料,又能提供能量,遵循的原则是碱基互补配对原则.
(4)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的温度和酸碱度.
(5)PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可分为变性、退火、延伸三个步骤.
故答案为:
(1)DNA分子具有双螺旋结构和DNA分子中碱基的互补配对
(2)氢 解旋 解旋酶
(3)3’既是原料,又能提供能量 碱基互补配对原则
(4)温度 酸碱度
(5)变性、退火和延伸
解析
解:(1)PCR技术能把某一DNA片段进行扩增,依据的原理是:DNA分子具有双螺旋结构和DNA分子中碱基的互补配对.
(2)加热使DNA双链打开,这一步是打开氢键,称为解旋,在细胞中是在解旋酶的作用下使此键断裂.
(3)当温度降低时,引物与模板3’端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA分子,此过程中加入四种脱氧核苷三磷酸的目的是既是原料,又能提供能量,遵循的原则是碱基互补配对原则.
(4)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的温度和酸碱度.
(5)PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可分为变性、退火、延伸三个步骤.
故答案为:
(1)DNA分子具有双螺旋结构和DNA分子中碱基的互补配对
(2)氢 解旋 解旋酶
(3)3’既是原料,又能提供能量 碱基互补配对原则
(4)温度 酸碱度
(5)变性、退火和延伸
近十年来,PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段,其原理是利用DNA半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如图),在很短的时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍,使实验所需要的遗传物质不再受限于活的生物体.
(1)加热使DNA双链打开,这一步是打开______键,在细胞中是在______的作用下使此键断裂.
(2)当温度降低时,引物与模板 3’端结合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最终合成2个DNA分子,此过程中遵循的原则是______.
(4)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的温度和______.
(5)PCR一般要经历三十多次循环,每次循环可分为______、______、______三个步骤.
正确答案
解:(1)PCR扩增中,双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开,而在细胞中,氢键是在解旋酶的作用下断裂的.
(2)中温延伸过程中遵循碱基互补配对原则.
(4)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的温度和引物.
(5)PCR技术的标准过程分为高温变性、低温复性和中温延伸三个步骤.
故答案为:
(1)氢 解旋酶
(2)碱基互补配对原则
(3)引物
(4)变性、复性、延伸
解析
解:(1)PCR扩增中,双链DNA解开不需要解旋酶,高温条件下氢键可自动解开,而在细胞中,氢键是在解旋酶的作用下断裂的.
(2)中温延伸过程中遵循碱基互补配对原则.
(4)PCR技术的必要条件,除了模板、原料、ATP、酶以外,至少还需要三个条件.即:液体环境、适宜的温度和引物.
(5)PCR技术的标准过程分为高温变性、低温复性和中温延伸三个步骤.
故答案为:
(1)氢 解旋酶
(2)碱基互补配对原则
(3)引物
(4)变性、复性、延伸
PCR技术是把某一DNA片段在酶的作用下,在体外合成许多相同片段的一种方法,利用它能快速而特异的扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段;电泳技术则是在外电场作用下,利用分子携带的净电荷不同,把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术,利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质作亲子鉴定.图中是电泳装置及相应电泳结果.
(1)电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较,后者使用的介质是______,叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是______.
(2)PCR技术能把某一DNA片段进行扩增,依据的原理是______.PCR实验步骤主要包括______.
(3)图3是把含21个氨基酸的多肽进行水解,得到的氨基酸混合物进行电泳的结果,据图可推知该多肽由______种氨基酸构成.
(4)图4通过提取某小孩和其母亲以及待测定的四位男性的DNA,分别由酶处理后,生成含有若干DNA片段,并进行扩增得到的混合物,然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱.请分析:F1~F4中,谁是该小孩真正生物学上的父亲?为什么?______.
正确答案
解:(1)色素分离的原理是四种色素在层析液中溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢.
(2)PCR把某一DNA片段在酶的作用下在体外合成许多相同片段,原理是DNA分子复制.PCR扩增DNA的过程包括:高温变性、低温复性、中温延伸三个过程.
(3)某氨基酸混合物电泳后出现分离,共有6个区域,故6种.
(4)子代的DNA是亲代DNA复制一份传来的.子代与亲代DNA相同,故F2与C为父子关系.
故答案为:
(1)层析液 各种色素随层析液在滤液上的扩散速度不同
(2)DNA复制 高温变性,低温复性,中温延伸
(3)6
(4)F2;子代与亲代DNA相同,故F2与C为父子关系
解析
解:(1)色素分离的原理是四种色素在层析液中溶解度不同,溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢.
(2)PCR把某一DNA片段在酶的作用下在体外合成许多相同片段,原理是DNA分子复制.PCR扩增DNA的过程包括:高温变性、低温复性、中温延伸三个过程.
(3)某氨基酸混合物电泳后出现分离,共有6个区域,故6种.
(4)子代的DNA是亲代DNA复制一份传来的.子代与亲代DNA相同,故F2与C为父子关系.
故答案为:
(1)层析液 各种色素随层析液在滤液上的扩散速度不同
(2)DNA复制 高温变性,低温复性,中温延伸
(3)6
(4)F2;子代与亲代DNA相同,故F2与C为父子关系
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