- 微生物的培养与应用
- 共1581题
为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌（目的菌）．有人做了如图实验：A、B、C培养基中______是唯一氮源，若三次试验结果记录到的菌落数分别为55、56、57，则每升土壤浸出液中含目的菌数为______个．
正确答案
解：（1）根据分析：为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌，A、B、C培养基中除草剂是唯一氮源．
（2）图中稀释的倍数是108，三个菌落的平均数=（55+56+57）÷3=56，则每毫升样品中菌株数=56÷1×108=5.6×109个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6×109×103=5.6×1012个．
故答案为：
除草剂 5.6×1012
解析
解：（1）根据分析：为了筛选土壤中能够降解某除草剂的细菌，A、B、C培养基中除草剂是唯一氮源．
（2）图中稀释的倍数是108，三个菌落的平均数=（55+56+57）÷3=56，则每毫升样品中菌株数=56÷1×108=5.6×109个，所以每升土壤浸出液中的菌株数=5.6×109×103=5.6×1012个．
故答案为：
除草剂 5.6×1012
全国土壤普查结果显示，近两成耕地已被污染．镉是水稻生产的主要重金属污染物．据此材料回答：
（1）用镉超标的大米饲喂雄性小鼠，发现其神经细胞的线粒体内膜断裂，则知小鼠完成反射的时间将______；此外，小鼠的睾丸组织有受损而逐渐萎缩，这将导致其体内雄性激素分泌______和促性腺激素的分泌______等变化．
（2）优良的土壤中往往存在多种生物．要研究污染物对土壤中蚯蚓，土鳖虫等动物类群丰富度的影响可以采用______的方法进行采样、调查．研究发现，受污染土壤其微生物的种类和数量会大幅度减少，这会直接降低该生态系统的______，从而降低其生态系统的稳定性．
（3）应用修复技术治理镉污染的土壤，可以进行：①微生物修复，若想探究土壤中是否存在吸附镉的微生物，以便用于今后的生态修复，筛选目标菌株的培养基成分为：蛋白胨、______、NaCl、H2O和琼脂．②植物修复，常选择种植菊芋等耐镉植物，这体现了生态工程的______原理．植物中积累的镉会通过______的富集作用造成危害，所以不能用修复地的植物饲喂动物．
正确答案
解：（1）根据题意，镉超标会使神经细胞的线粒体内膜断裂，故影响了线粒体供能，所以反射的时间因能量不足而延长．小鼠睾丸组织受损，则睾丸分泌的雄性激素减少，反馈作用减弱使促性腺激素分泌增多．
（2）研究土壤中蚯蚓，土鳖虫等动物类群丰富度，常采用取样器取样的方法进行采样、调查．受污染土壤其微生物的种类和数量会大幅度减少，这会直接降低该生态系统的物种多样性，导致自我调节能力减弱，从而降低其生态系统的稳定性．
（3）①微生物修复：要用选择培养基筛选目标菌株，即培养基成分为：蛋白胨、镉、NaCl、H2O和琼脂等．
②植物修复：常选择种植菊芋等耐镉植物，这体现了生态工程的协调与平衡原理．由于植物中积累的镉会通过食物链的富集作用造成危害，所以不能用修复地的植物饲喂动物．
故答案为：
（1）延长 减少 增多
（2）取样器取样 物种多样性
（3）镉 协调与平衡 食物链（网）
解析
解：（1）根据题意，镉超标会使神经细胞的线粒体内膜断裂，故影响了线粒体供能，所以反射的时间因能量不足而延长．小鼠睾丸组织受损，则睾丸分泌的雄性激素减少，反馈作用减弱使促性腺激素分泌增多．
（2）研究土壤中蚯蚓，土鳖虫等动物类群丰富度，常采用取样器取样的方法进行采样、调查．受污染土壤其微生物的种类和数量会大幅度减少，这会直接降低该生态系统的物种多样性，导致自我调节能力减弱，从而降低其生态系统的稳定性．
（3）①微生物修复：要用选择培养基筛选目标菌株，即培养基成分为：蛋白胨、镉、NaCl、H2O和琼脂等．
②植物修复：常选择种植菊芋等耐镉植物，这体现了生态工程的协调与平衡原理．由于植物中积累的镉会通过食物链的富集作用造成危害，所以不能用修复地的植物饲喂动物．
故答案为：
（1）延长 减少 增多
（2）取样器取样 物种多样性
（3）镉 协调与平衡 食物链（网）
为了了解土壤微生物能否分解农药，并尽快得出实验结论，有人用“敌草隆”（一种除草剂）进行实验：取等量砂土分装于相同的两容器中，a组高压灭菌，b组不灭菌．下列有关事项的叙述中正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、本实验的自变量的有无土壤微生物，而敌草隆的使用量和培养条件是无关变量，无关变量应保持一致且适宜，所以应向a、b中喷入等量敌草隆，再置于同一温箱中培养相同时间，A正确；
B、a组土壤经过高压灭菌，不含微生物，不能将“敌草隆”分解，预计a的“敌草隆”基本不变，b组不灭菌，存在土壤微生物，可能将“敌草隆”分解，预计b的“敌草隆”含量减少，但不会全部消失，B错误；
C、不同的土壤微生物的种类和数量不同，只用砂土实验效果不如几种典型土壤混合后的好，C错误；
D、本实验是验证土壤中的微生物能对农药“敌草隆”具有分解作用，若不喷入“敌草隆”，则不能证明土壤中的微生物的此种作用，D错误．
故选：A．
有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等．研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐、以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物．分析回答问题．
（1）培养基中加入的化合物A是______，为微生物的生长提供______，这种培养基属于______培养基．
（2）为了筛选出能产生纤维素酶的微生物，向培养基中加入______．形成______色复合物，若产生______，则证明有纤维素分解菌存在．
（3）在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，______．若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是______，操作时采用______灭菌的方法；还可用______方法操作．
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是______．
正确答案
解：（1）能产生纤维素酶就能利用纤维素，故应以纤维素为唯一碳源，故A是纤维素，为微生物的生长提供碳源，从功能上属于选择培养基．
（2）刚果红染料能与纤维素形成红色复合物，但不能与其分解后的产物形成红色复合物，故应加入刚果红，筛选出能产生纤维素酶的微生物．形成红色复合物，若产生透明圈，则证明有纤维素分解菌存在．
（3）在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，增加微生物的浓度．若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是
接种环，操作时采用灼烧灭菌的方法；还可用稀释涂布平板方法操作．
（4）使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样可以避免杂菌对环境造成污染．
故答案为：
（1）纤维素 碳源 选择
（2）刚果红 红 透明圈
（3）增加微生物的浓度 接种环 灼烧 稀释涂布平板
（4）防止造成环境污染
解析
解：（1）能产生纤维素酶就能利用纤维素，故应以纤维素为唯一碳源，故A是纤维素，为微生物的生长提供碳源，从功能上属于选择培养基．
（2）刚果红染料能与纤维素形成红色复合物，但不能与其分解后的产物形成红色复合物，故应加入刚果红，筛选出能产生纤维素酶的微生物．形成红色复合物，若产生透明圈，则证明有纤维素分解菌存在．
（3）在筛选出能产生纤维素酶的微生物之前，可用液体培养基培养，增加微生物的浓度．若获得纯净的菌株，常采用平板划线的方法进行接种，此过程所用的接种工具是
接种环，操作时采用灼烧灭菌的方法；还可用稀释涂布平板方法操作．
（4）使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样可以避免杂菌对环境造成污染．
故答案为：
（1）纤维素 碳源 选择
（2）刚果红 红 透明圈
（3）增加微生物的浓度 接种环 灼烧 稀释涂布平板
（4）防止造成环境污染
某种细菌体内某氨基酸X的生物合成途径如下：底物
这种细菌的野生型能在基本培养基（满足野生型细菌生长的简单培养基）上生长，而由该种细菌野生型得到的两种突变型（甲、乙）都不能在基本培养基上生长；在基本培养基上若添加中间产物2，则甲、乙都能生长；若添加中间产物1，则乙能生长而甲不能生长．在基本培养基上添加少量的X，甲能积累中间产物1，而乙不能积累．
请回答：
（1）根据上述资料可推论：甲中酶______的功能丧失；乙中酶______的功能丧失，甲和乙中酶______的功能都正常．由野生型产生甲、乙这两种突变型的原因是野生型的______（同一、不同）菌体中的不同______发生了突变，从而导致不同酶的功能丧失．如果想在基本培养基上添加少量的X来生产中间产物1，则应选用______（野生型、甲、乙）．
（2）将甲、乙混合接种于基本培养基上能长出少量菌落，再将这些菌落单个挑出分别接种在基本培养基上都不能生长．上述混合培养时乙首先形成菌落，其原因______．
（3）在发酵过程中，菌体中X含量过高时，其合成速率下降．若要保持其合成速率，可采取的措施是改变菌体细胞膜的______，使X排出菌体外．
正确答案
b
a
c
不同
基因
甲
甲产生的中间产物1供给乙，使乙能够合成X，保证自身生长产生菌落
通透性
解析
解：（1）由题干“乙能生长而甲不能生长”，可知乙细菌酶a功能丧失，甲细菌中酶b功能丧失；由于由“在基本培养基上若添加中间产物2，则甲、乙都能生长”，说明甲乙细菌的酶c都正常；产生甲、乙两种突变的原因是野生型的不同菌体的不同基因发生了突变；因为“在基本培养基上添加少量的X，甲能积累中间产物1”，所以要想生产中间产物1，应该选用甲． （2）由题干“若添加中间产物1乙能生长”，而“甲能积累中间产物1”，所以将甲、乙混合培养时甲产生的中间产物1能使乙合成X，使乙首先形成菌落．
（3）在发酵过程中，可以采取一定的技术手段改变细胞膜的通透性，使X排出细胞外．
故答案为：
（1）b a c 不同 基因 甲
（2）甲产生的中间产物1供给乙，使乙能够合成X，保证自身生长产生菌落
（3）通透性
图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增．以下说法正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、活性污泥不需要进行灭菌处理，A错误；
B、②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量；③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，即培养出以甲醛为唯一碳源的细菌，B错误；
C、目的菌种异化作用是需氧型，C错误；
D、经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养，D正确．
故选：D．
农田土壤的表层，自生固氮菌的含量比较多，将用表层土制成的稀泥浆，接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其它细菌分开，对培养的要求是（ ）
①加抗生素 ②不加抗生素 ③加氮素 ④不加氮素 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖．
正确答案
解析
解：①②自生固氮微生物属于细菌，其细胞壁的主要成分是肽聚糖，对抗生素敏感，因此培养基中不能加入抗生素，①错误，②正确；
③③自生固氮微生物是一类能够独立进行固氮的微生物，培养基中可以不添加氮源，③错误，④正确；
⑤⑥自生固氮微生物的代谢类型是异养需氧型，培养基必须添加葡萄糖作为碳源和能源，⑤正确，⑥错误．
所以②④⑤正确．
故选：D．
野生型大肠杆菌能在基本培养基上生长，用射线照射野生型大肠杆菌得到一突变株，该突变株在基本培养基上培养时必须添加氨基酸甲后才能生长．对这一实验结果的解释，不合理的是（ ）
正确答案
解析
解：A、野生型大肠杆菌可以合成氨基酸甲，A正确；
B、野生型大肠杆菌代谢需要氨基酸甲，虽培养基中没有氨基酸甲，但是野生型的大肠杆菌可以合成氨基酸甲，B错误；
C、由于培养基中没有氨基酸甲，但是含有合成氨基酸甲的酶，所以能够正常生长，C正确；
D、突变株中合成氨基酸甲所需酶的功能可能丧失也会导致氨基酸甲无法合成，D正确．
故选：B．
在农田土壤的表层自生固氮细菌较多，用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮细菌与其他细菌分开，下列对这种培养基的要求中，不正确的是（ ）
正确答案
解析
解：A、自生固氮菌的生长繁殖的最适宜温度是28～30℃，所以适宜在28～30℃下培养，A正确；
B、自生固氮菌能利用空气中的氮气，培养基中不加氮源，固氮菌能生长繁殖，不能固氮的菌不能生长繁殖，所以不需要加氮素，B正确；
C、自生固氮菌是异养菌，生长繁殖需要有机碳源，所以需要加葡萄糖，C正确；
D、自生固氮菌对抗生素敏感，所以培养基中不能加抗生素，D错误．
故选：D．
（2012春•彭州市校级月考）根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型，利用选择培养基和鉴别培养基，结合显微镜镜检以及菌落特征，可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌、尿细菌、纤维杆菌分离开来．下面是分离筛选的方法步骤，请根据各个步骤的条件，填写空格中的内容：首先配制一系列不同性质的固体培养基，然后进行高温灭菌．再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养．
（1）在无氧环境下培养混合菌，______可以生长，加入一定浓度的乳酸，使培养基pH充分降低，可抑制______的生长，利用菌落特征，结合显微镜镜检，选取生长优势的菌落，即可分离出______．
（2）利用无氮培养基可筛选出______．
（3）用不含有机碳源的选择培养基可筛选出______．
（4）酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加入______．
（5）用含较高浓度NaCl的培养基可选择出______；或者根据菌落的颜色呈现______ 色，将其挑取单独培养．
（6）利用伊红和美蓝培养基培养混合菌，菌落呈______色并带有金属光泽的是______，挑取该菌落单独培养，结合显微镜镜检和进一步用伊红和美蓝鉴别培养基来确定．
（7）若筛选能分解尿素的细菌，则配制的培养基特点是______．
正确答案
【解答】解：（1）无氧条件下乳酸菌和酵母菌可以生长，加入一定浓度乳酸可以抑制酵母菌的生长，随后筛选出乳酸菌．
（2）无氮培养基可筛选出能固氮的微生物，即圆褐固氮菌．
（3）不含有机碳源的选择培养基可筛选出自养型微生物，即硝化细菌．
（4）酵母菌是真菌，筛选时常在培养基中加入抗生素，防止其他细菌的生长．
（5）用含较高浓度NaCl的培养基可选择出金黄色葡萄球菌；或者根据金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，将其挑取单独培养．
（6）利用伊红和美蓝培养基可用来培养和鉴定大肠杆菌，菌落呈黑色并带有金属光泽．
（7）以尿素为唯一氮源的培养基上筛选尿素分解菌．
故答案为：1）乳酸菌和酵母菌 酵母菌 乳酸菌
（2）圆褐固氮菌
（3）硝化细菌
（4）青霉素（或抗生素）
（5）金黄色葡萄球菌 金黄
（6）深紫 大肠杆菌
（7）氮源只含尿素．
解析
【解答】解：（1）无氧条件下乳酸菌和酵母菌可以生长，加入一定浓度乳酸可以抑制酵母菌的生长，随后筛选出乳酸菌．
（2）无氮培养基可筛选出能固氮的微生物，即圆褐固氮菌．
（3）不含有机碳源的选择培养基可筛选出自养型微生物，即硝化细菌．
（4）酵母菌是真菌，筛选时常在培养基中加入抗生素，防止其他细菌的生长．
（5）用含较高浓度NaCl的培养基可选择出金黄色葡萄球菌；或者根据金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，将其挑取单独培养．
（6）利用伊红和美蓝培养基可用来培养和鉴定大肠杆菌，菌落呈黑色并带有金属光泽．
（7）以尿素为唯一氮源的培养基上筛选尿素分解菌．
故答案为：1）乳酸菌和酵母菌 酵母菌 乳酸菌
（2）圆褐固氮菌
（3）硝化细菌
（4）青霉素（或抗生素）
（5）金黄色葡萄球菌 金黄
（6）深紫 大肠杆菌
（7）氮源只含尿素．
在将样品稀释涂布到鉴别纤维分解菌的培养基之前，通常进行选择培养，其目的是（ ）
正确答案
解析
解：分解纤维素的微生物的基本过程如下：土壤取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落，其中选择培养的目的是增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需的微生物．
选择培养所用的培养基中唯一的碳源是纤维素，在纤维素分解菌的培养基中需要加入的特殊物质是刚果红，该物质能够与纤维素反应生成红色复合物，如果某个菌落的周围出现了透明圈，说明该种微生物能够产生纤维素酶，能够分解纤维素．
故选：D．
生物柴油能减缓人类对石油的依赖，降低大气污染物的排放．假丝酵母分泌的脂肪酶能把植物油转化为生物柴油（脂肪酸甲脂）．请回答：
（1）筛选假丝酵母时，培养基中应以______为唯一碳源．根据培养基中菌落外周______大小，挑取脂肪酶产量及活性高的假丝酵母．
（2）脂肪酶为胞外酶，存在于假丝酵母培养液中，利用多孔树脂柱可分离酵母液中脂肪酶，此方法称为______．测定培养液中假丝酵母数量的常用方法是______．
（3）用氨基化硅胶做载体，用戊二醛做交联剂可固化脂肪酶，此种固化方法为______．固化酶技术使酶得以______，降低了生产成本．
（4）微藻中的ACC基因可提高油脂的含量，在将ACC基因导入微生物前，需用______技术扩增ACC基因，该过程需要______催化．
正确答案
解：（1）由于假丝酵母分泌的脂肪酶能把植物油转化为生物柴油，所以筛选假丝酵母时，培养基中应以植物油为唯一碳源．根据培养基中菌落外周透明圈大小，挑取脂肪酶产量及活性高的假丝酵母．
（2）由于脂肪酶为胞外酶，存在于假丝酵母培养液中，可以通过凝胶色谱法分离酵母液中脂肪酶．测定培养液中假丝酵母数量的常用方法是血球计数板计数．
（3）用氨基化硅胶做载体，用戊二醛做交联剂可固化脂肪酶，此种固化方法为化学结合法．固化酶技术使酶得以重复利用，降低了生产成本．
（4）微藻中的ACC基因可提高油脂的含量，在将ACC基因导入微生物前，需用PCR技术扩增ACC基因，该过程需要TaqDNA聚合酶催化．
故答案为：
（1）植物油 透明圈
（2）凝胶色谱法 血球计数板计数
（3）化学结合法 重复利用
（4）PCR TaqDNA聚合酶
解析
解：（1）由于假丝酵母分泌的脂肪酶能把植物油转化为生物柴油，所以筛选假丝酵母时，培养基中应以植物油为唯一碳源．根据培养基中菌落外周透明圈大小，挑取脂肪酶产量及活性高的假丝酵母．
（2）由于脂肪酶为胞外酶，存在于假丝酵母培养液中，可以通过凝胶色谱法分离酵母液中脂肪酶．测定培养液中假丝酵母数量的常用方法是血球计数板计数．
（3）用氨基化硅胶做载体，用戊二醛做交联剂可固化脂肪酶，此种固化方法为化学结合法．固化酶技术使酶得以重复利用，降低了生产成本．
（4）微藻中的ACC基因可提高油脂的含量，在将ACC基因导入微生物前，需用PCR技术扩增ACC基因，该过程需要TaqDNA聚合酶催化．
故答案为：
（1）植物油 透明圈
（2）凝胶色谱法 血球计数板计数
（3）化学结合法 重复利用
（4）PCR TaqDNA聚合酶
某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A．研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）．实验的主要步骤如下图所示．请分析回答下列问题．
（1）培养基中加入化合物A的目的是______，这种培养基属于______培养基．
（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的______．实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的呼吸作用类型是______．
（3）转为固体培养基时，常采用平板划线的方法进行接种，此过程中所用的接种工具是______，操作时采用______灭菌的方法．
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，这样做的目的是______．
（5）某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10-4、10-5、10-6稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿．从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是______，此对照实验的目的是证明______过程中是否被杂菌污染．
正确答案
筛选目的
选择
化合物A
异养需氧型
接种环
灼烧
防止造成环境污染
不接种的空白培养基
证明培养基制备中是否被杂菌污染
解析
解：（1）培养基中加入化合物A是为分解化合物A的微生物提供碳源和氮源，分离出能分解化合物A的微生物；这中培养基从功能上分属于选择培养基．
（2）分析培养基的配方可知，该培养基由化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制而成，因此化合物A为目的菌提供了碳源和氮源；目的菌是需氧微生物，因此在培养过程中应该震荡培养，增加培养液中的溶氧量满足微生物对氧气的需求．
（3）平板划线操作的工具是接种环，对于接种环的灭菌方法应该是灼烧灭菌．
（4）实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，防止造成环境污染．
（5）实验设计过程应遵循对照原则，该实验还应增设一组不接种的空白培养基作为对照，以证明培养基制备是否被杂菌污染．
故答案为：
（1）筛选目的菌 选择
（2）化合物A 异养需氧型
（3）接种环 灼烧
（4）防止造成环境污染
（5）不接种的空白培养基 证明培养基制备中是否被杂菌污染
在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入10%NaCL溶液．利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出（ ）
正确答案
解析
解：青霉素可以抑制细菌和放线菌，在添加青霉素的选择培养基上可以筛选分离真菌（如霉菌），在缺乏氮源的选择培养基上可以筛选分离固氮微生物，加入10%NaCL溶液的培养基可以筛选分离金黄色葡萄球菌．
故选：C．
（四）生物技术广泛应用于医疗、农业、工业等领域．下列是与生物工程类相关的问题：
Ⅰ．生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）．
（1）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供______，培养基灭菌采用的最适方法是______法．
（2）可利用______技术使脂肪酶能够重复使用．
（3）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的______技术．
Ⅱ．生长激素在治疗激素分泌过少的矮小症方面有积极的作用．为了批量生产生长激素，可以采取转基因技术将控制生长激素合成的基因转移到微生物细胞内．
下列是涉及此转基因技术的几种限制酶识别序列及其割位点；图1、图2中箭头表示相关限制酶对质粒和供体DNA的切割位点：
请回答下列问题：
（1）四种酶切位点相比较，Sma I酶切位点结构最稳定，原因是______
（2）用图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用Sma I切割，原因是______．
（3）与只是用EcoR I 相比较，使用BamH I和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、目的基因的优点在于可以防止______．
（4）为了检测基因转导的成功，需要在培养微生物的培养基中加入______，若微生物能正常生长，说明转导成功．
正确答案
碳源
高压、高温、蒸汽灭菌
固定化酶
PCR（或：多聚链式反应，聚合酶链式反应）
碱基C-G具有三对氢键
SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
抗生素
解析
解：Ⅰ（1）植物油属于脂肪中的一种，其元素组成只有CHO，因此筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供碳源．培养基灭菌采用的最适方法是高压、高温、蒸汽灭菌法．
（2）可利用固定化酶技术使脂肪酶能够重复使用．
（3）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的PCR（或：多聚链式反应，聚合酶链式反应）技术．
Ⅱ（1）DNA分子的热稳定性与DNA分子中的氢键有关，氢键越多越稳定．而在DNA分子中存在A-T、C-G两种碱基对，其中A和T之间有两个氢键连接，而C和G之间以三个氢键连接，因此C-G碱基对比例越高，DNA分子越稳定，因此四种酶切位点相比较，Sma I酶切位点结构最稳定．
（2）图中质粒的标记基因为抗生素抗性基因，而Sma I的切割位点就在该基因上，SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因，因此不能使用Sma I切割．
（3）由于同种限制酶切割形成的黏性末端相同，为防止酶切后单个含目的基因的DNA片段自身连接成环状，不能使用EcoRⅠ．
（4）为了检测基因转导的成功，需要在培养微生物的培养基中加入抗生素，若微生物能正常生长，说明转导成功．
故答案为：
Ⅰ．（1）碳源 高压、高温、蒸汽灭菌
（2）固定化酶
（3）PCR（或：多聚链式反应，聚合酶链式反应）
Ⅱ．（1）碱基C-G具有三对氢键
（2）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因
（3）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化
（4）抗生素
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