- 血红蛋白的提取和分离
- 共132题
红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白,请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步:______、______、______和______。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①.加入柠檬酸钠的目的是________。
②.以上所述的过程即是样品处理,它包括红细胞洗涤、_______、分离血红蛋白溶液。
③.洗涤红细胞的目的是________,你如何知道红细胞已洗涤干净?_________。
④.分离红细胞对离心速度及离心时间的要求分别是__________________。
⑤.如若离心速度过高和时间过长结果会怎样?_______________________。
正确答案
(1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定
(2)①.防止血液凝固 ②.血红蛋白的释放 ③.去除杂蛋白 离心后的上清液没有黄色 ④.低速500r/min、短时间如2min ⑤.离心速度过高和时间过长会使白细胞和淋巴细胞一同沉淀,得不到纯净的红细胞,影响后续血红蛋白的提取纯度
(选做题)科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白,这种蛋白质具有极强的抗菌能力,受到研究者重视。
(1)分离该抗菌蛋白可用电泳法,其原理是根据蛋白质分子的__________________、大小及形状不同,在电场中的____________不同而实现分离。
(2)可用金黄色葡萄球菌来检验该蛋白的抗菌特性。抗菌实验中所用培养基中的牛肉膏和蛋白胨主要为细菌生长提供_____________和_____________。
(3)分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种等量菌液。培养一定时间后,比较两种培养基中菌落的________________,确定该蛋白质的抗菌效果。
(4)细菌培养常用的接种方法有________________和________________。实验结束后,对使用过的培养基应进行_________处理。
正确答案
(1)电荷(带电情况) 迁移速度
(2)碳源 氮源
(3)数量
(4)平板划线法 稀释涂布平板法(稀释混合平板法) 灭菌
凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术,由于设备简单、操作方便,不需要有机溶剂,对高分子物质有很高的分离效果,目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛应用,不但应用于科学实验研究,而且已经大规模地用于工业生产。据下图回答问题:
(1)a、b均为蛋白质分子,其中先从层析柱中洗脱出来的是_________,原因是__________。
(2)自己制作凝胶色谱柱时,在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由________替代。
(3)装填凝胶色谱柱时,色谱柱内不能有气泡存在,原因是__________。
(4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体_________(填“相同”或“不同”),洗脱时,对洗脱液的流速要求是______________。
正确答案
(1)a a的相对分子质量大,无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快
(2)尼龙网和尼龙纱
(3)气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序,降低分离效果
(4)相同 保持稳定
红细胞内含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2或者CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:
(1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步:_______、粗分离、纯化和______。
(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。
①.加入柠檬酸钠的目的是__________。
②.以上所述的过程即是样品处理,它包括红细胞的洗涤、________、________。
(3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离,其方法是__________。
(4)然后通过_______将样品进一步纯化,最后经________进行纯度鉴定。样品纯化的目的是__________。
(5)电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及________、形状的不同,使带电分子产生不同的迁移速率,从而实现样品中各种分子的分离。
正确答案
(1) 样品处理 纯度鉴定
(2)①.防止血液的凝固 ②.血红蛋白的释放 分离血红蛋白溶液
(3)透析
(4)凝胶色谱法 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去
(5)分子本身的大小
(附加题)红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。根据材料回答下列问题:
(1)实验前取新鲜血液,要在采血器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是____________。
(2)在对样品进行处理时,主要包括______、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中透析技术的原理是__________。
(3)同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离,在电泳过程中,影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的______、______以及分子的形状等。
(4)同学乙利用凝胶色谱法进行血红蛋白的分离(如图一),他在操作中加样的正确顺序是_________,在执行图一中②所示操作时,色谱柱下端连接的尼龙管应该______(打开或关闭)。
(5)图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果,则图三中与图二中蛋白质P对应的是____________。
正确答案
(1)防止血液凝固
(2)红细胞的洗涤 小分子可以自由进出透析袋(半透膜),而大分子不能通过
(3)大小 带电性质
(4)④①②③ 关闭
(5)丙
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