- DNA重组技术的基本工具
- 共1894题
红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白,可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限,目前临床上使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(thEPO),其简要生产流程如下图。请回答:
(1)图中①所指的是_________技术。
(2)图中②所指的物质是_________,③所指的物质是______________。
(3)培养重组CHO细胞时,为便于清除代谢产物,防止细胞产物积累对细胞自身造成危害,应定期更换________。
(4)检测thEPO的体外活性需用抗thEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的________细胞,可由thEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。
正确答案
(1)PCR
(2)mRNA thEPO
(3)培养液
(4)杂交瘤
下图表示基因控制胰岛素合成过程的示意图,请分析并回答:
(1)DNA分子基本骨架由____________交替排列构成,DNA分子的多样性体现在____________。
(2)在图中④结构中完成的是__________过程,即________________。
(3)图中甘氨酸的密码子是____________,控制该蛋白合成的基因中,决定“…一甘氨酸一异亮氨酸一缬氨酸一谷氨酸一…”的模板链是图中的________________。
(4)通过转基因技术,可以将人胰岛素基因转入大肠杆菌合成人胰岛素。形成重组质粒需要用到的酶有__________,其作用位点是图中的_______________处(填图中序号)。
正确答案
(1)磷酸和脱氧核糖 脱氧核糖核苷酸(或碱基对、碱基)的数量和排列顺序
(2)翻译 以mRNA为模板合成有一定氨基酸顺序的多肽链
(3)GGC 甲链
(4)限制性核酸内切酶(或限制酶)和DNA连接酶 ③
下列是某基因控制合成mRNA以及多肽链的示意图(UAA为终止密码子):
请回答:
(1)该mRNA片段中亮氨酸的密码子有________种,分别是_________。亮氨酸的密码子不止一种,这一现象叫密码子的____________,你认为这对生物体的生存发展有何意义?________________。
(2)若由于某种原因编码该段多肽链的基因中某个碱基缺失,转录的mRNA中碱基也缺失(见图↓标志),则该片段控制合成多肽链的氨基酸的序列是______________________________________。
(3)如果大量需要以上的多肽链片段,可以利用基因工程技术手段制备,相关的图和表如下:
请回答:
①.假设所用的限制酶均能将所识别的位点完全切开,采用EcoRⅠ和PstⅠ切含有目的基因的DNA,能得到_______种DNA片段。如果将质粒载体和控制含目的基因DNA片段只用EcoRI酶切,酶切产物再加入DNA连接酶,其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_______、________、________三种。
②.为了防止目的基因和质粒表达载体的酶切后的末端任意连接,酶切时应该选用的酶是____、____。
正确答案
(1)3 CUU、UUG、CUA 简并性 增加容错率(答案合理即可)
(2)甲硫氨酸—亮氨酸—丝氨酸—亮氨酸—亮氨酸—半胱氨酸
(3)①.4 质粒载体—质粒载体连接物 目的基因—目的基因连接物 质粒载体—目的基因连接物
②.EcoRI SmaI
果酒、面包制作等都需要酵母菌,酵母菌可以用液体培养基(培养液)来培养,培养液中酵母菌种群的增长情况与发酵食品的制作有密切关系。
(1)土壤是酵母菌的大本营,若从自然界分离得到的样品中含有谷氨酸棒状杆菌、硝化细菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌等,现欲筛选出酵母菌,则简便的方案是____。
(2)某生物兴趣小组的同学在不同的条件下,观察酵母菌种群的生长情况。下表中的数据是在有氧情况下培养测得的酵母菌数(×106个/mL)。请根据所学的知识,回答下列有关问题:
实验研究的条件如下:
A:培养液10mL,加入干酵母液0.1mL,环境温度28℃。
B:无菌水10mL,加入干酵母液0.1mL,环境温度28℃。
①.请写出该实验的课题名称:_________________。
②.本实验过程中,每隔24小时取一定量的酵母菌培养液,用血球计数板在显微镜下进行细胞计数,并以多次计数的平均值估算试管中酵母菌的种群密度,这种方法称为________。每次取样前都应振荡试管,目的是使________。如果视野太暗导致看不清晰,应当采取的措施是___________。
③.A组测定的数据中,培养一天和培养六天的酵母菌数均为0.8×l06个/mL,你认为其生长情况相同吗?________,理由是________________。
(3)目前,我国已经利用酵母菌实现了乙肝疫苗、干扰素的商业化生产。在这些技术中使用的工具酶是______。在实际应用中发现,用真菌(酵母菌)生产的基因工程药物(如干扰素)要比用细菌生产的功效好。请从这两类生物细胞结构的相关差异说明原因:__________________。
正确答案
(1)在培养基中加入青霉素或无氧状态培养
(2)①.营养物质对酵母菌种群增长的影响
②.取样调查法 试管中酵母茵分布均匀,减少计数误差 增大光圈或将平面镜改为凹面镜
③.不相同 培养一天和培养六天的酵母茵分别处于调整期和衰亡期
(3)限制性内切酶和DNA连接酶 真菌(酵母菌)细胞有很多细胞器,高尔基体、内质网能将核糖体合成的蛋白质进行加工,与人体内的蛋白质合成过程更相似
2001年,Schittek等科学家从人体汗液中分离得到一种称作Dermcidin(DCD)的人汗腺抗菌肽,这种物质具有抗细菌、真菌、病毒等的活性,有望成为替代普通抗生素的一类新型药物。研究人员已分离获得了控制DCD合成的基因。请据此回答问题:
(1)为了评估DCD的抗菌性,研究人员用大肠杆菌进行了抗菌实验。分别在未加入DCD的培养基和_____的培养基中接种______。培养一段时间后,比较两种培养基中的_______,确定该物质的抗菌效果。实验所用培养基为细菌生长提供的主要营养有_______。在此基础上,培养基还需满足细菌生长对_______、特殊营养物质以及氧气的要求。
(2)应用PCR技术可以对DCD基因进行体外大量扩增。此过程需在一定的缓冲溶液中进行,反应体系中应提供模板、引物、______作为原料以及______酶。同时,通过控制______条件使DNA复制在体外反复进行。理论上,若要将DCD基因转入其他生物,可将此基因与_______连接构建形成重组DNA之后导入受体细胞,在此构建过程中需用到的工具酶是______。
正确答案
(1)加入DCD 大肠杆菌(菌液) 菌落数目 水、碳源、氮源、无机盐 pH
(2)4种游离的脱氧核苷酸(或dNTP) 耐高温的DNA聚合 温度 (运)载体 限制酶和DNA连接酶
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