- DNA重组技术的基本工具
- 共1894题
(选做题A)以重组DNA技术为核心的基因工程正在改变着人类的生活。请回答下列问题。
(1)获得目的基因的方法通常包括___________和_______________。
(2)切割和连接DNA分子所使用的酶分别是_______和_________。
(3)运送目的基因进入受体细胞的载体一般选用病毒或____________，后者的形状成_________。
(4)由于重组DNA分子成功导入受体细胞的频率___________，所以在转化后通常需要进行_______操作。
(5)将人胰岛素基因分别导入大肠杆菌与酵母菌，从两者中生产的胰岛素在功能和_____序列上是相同的。
正确答案
(1)化学合成(人工合成) 酶切获取(从染色体DNA分离/从生物细胞分离)
(2)限制性核酸内切酶(限制酶) DNA连接酶(连接酶)
(3)质粒 小型环状(双链环状、环状)
(4)低 筛选
(5)氨基酸
(附加题)限制酶A的识别序列和切点是-A↓ACGTT-，限制酶B的识别序列和切点是-↓ACGT-。在质粒C上有酶A的一个切点，在目的基因D的两侧各有1个酶B的切点。据此回答以下问题：
(1)请画出质粒C被限制酶A切割后所形成的黏性末端。
(2)不同的限制酶识别的脱氧核苷酸序列_________(一定或可能)不同，不同的限制酶切割DNA分子形成的黏性末端_______(一定或可能)相同。
(3)把由目的基因D和质粒C连接形成的重组质粒导入蛙的受精卵，采用最多也最有效的方法是__________________。
正确答案
(1)
(2)一定 可能
(3)显微注射法
基因工程中涉及多种工具酶。
(1)限制酶是一种能识别特定核苷酸序列并在特定位点切割双链DNA的“基因剪刀”。被限制酶识别的序列往往正反读顺序相同，断裂的位置交错，但又是围绕着一个轴线(对称轴)对称排列的，如下图甲。PstI和EcoRI都是限制酶。请补全下图乙的互补链，画出对称轴以及切割后的产物。
(2)DNA连接酶是基因操作的“分子缝合针”，其作用是把基于______能力而黏合在一起但存在的切口封闭，进而才可能形成有意义的________。
(3)逆转录酶也常被用于基因工程，其存在于_______(生物)中，催化以______为模板合成DNA的过程。
正确答案
(1)
(2)碱基互补配对 重组DNA
(3)(某些)病毒 mRNA
(附加题)2010年1月“广州—东莞首届国际小型猪学术论坛”在南方医科大学开幕，大会认为：去年8月，我国新型带有荧光标记的转基因克隆猪诞生，标志着广东转基因技术接近世界先进水平。结合所学知识回答下列问题：
(1)在培育带有荧光标记的转基因克隆猪时，用到的基因操作的工具酶中对核苷酸序列有严格要求的是__________。
(2)较为理想的运载体需要具有以下特点：如能在宿主细胞内_______；具有_______，以便与外源基因连接等。
(3)在克隆猪的体内合成出荧光蛋白并不是研究的最终目的，因此控制合成荧光蛋白的基因应该属于_________基因。
(4)在进行基因转移时，通常要将外源基因转入猪的受精卵(或早期胚胎)中，原因是______。
(5)培育转基因克隆猪应进行胚胎移植，为保证移植成功，一般选择早期胚胎发育至____时进行移植，且应选择________相同的同种母畜作为代孕动物。如果想同时得到多头基因型相同的转基因克隆猪，可通过________技术得以实现。
正确答案
(1)限制酶
(2)复制并稳定保存 多个限制酶切点
(3)标记
(4)受精卵(或早期胚胎细胞)具有全能性，可使外源基因在相应组织细胞中表达
(5)桑椹胚或囊胚 生理状态 胚胎分割移植
下图(一)为某基因工程中利用的质粒筒图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，ampR为青霉素(抗生素)抗性基因，tctR为四环素(抗生素)抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。下图(二)为几种酶作用于基因的位置。请回答下列问题：
(1)在基因工程中常用的工具有三种：一是用作切取目的基因的_________酶；二是将目的基因与运载体拼接的_________酶；三是作为运载体的质粒。
(2)将含有目的基因的DNA与经特定的酶切后的动载体(质粒)进行拼接形成重组DNA，理论上讲，重组DNA可能有“____________”、“____________”、“___________”三种，其中有效的(所需要的)基因表达载体是____________，因此需要对这些拼接产物进行分离提纯。
(3)利用图(一)所示的质粒拼接形成的3种拼接产物(基因表达载体)与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的拼接产物(基因表达载体)是_______。
(4)有效的基因表达载体成功导入受体细胞进行表达时，首先需要进行转录，RNA聚合酶识别和结合的位点是图(一)中的________。在动物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是________。在植物基因工程中，将基因表达载体导入受体细胞的常用方法是_________。是因为这种微生物很容易侵染到_________中，从而把它的Ti质粒上的_________转移到受体细胞染色体的DNA上。
(5)在基因工程中，作用于图(二)所示a位置的酶是____________；作用于b位置的酶是____________。
正确答案
(1)限制(限制性核酸内切酶) DNA连接
(2)目的―目的基因 目的基因―运载体 运载体―运载体 目的基因―动载体
(3)运载体―运载体和目的基因―运载体
(4)P(启动子) 显微注射法 农杆菌转化法 双子叶植物和裸子植物 T-DNA
(5)限制酶(限制性内切酶) DNA解旋酶
扫码查看完整答案与解析