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简答题

富集培养是微生物学中的最强有力的技术手段之一。富集条件可根据所需分离的微生物的特点,从物理、化学、生物及综合多个方面进行选择,如温度、pH、紫外线、高压、光照、氧气、营养等许多方面,使仅适合该条件的微生物数量大大增加。下图描述了采用富集方法从土壤中分离能降解酚类化合物(对羟基苯甲酸)的微生物的实验过程。

请分析后回答:

(1)所需的土壤样品应该从__________(农田、工厂、森林)取得。

(2)该实验的原理是________________________。

(3)①→③重复培养的目的是___________。该过程中使用的培养基的物理状态是____________。该培养基中的碳源是_____________。根据用途划分,该培养基的类型为_________________。

(4)⑤中主要是______________形成的菌落。

(5)⑥为________组,⑦为________组,设置对照的目的是______________。

(6)实验操作过程中的无菌操作有:_________________________(至少写两点)。

正确答案

(1)工厂

(2)利用以对羟基苯甲酸为唯一的碳源作选择培养基,经富集培养,选择出能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物

(3)增大分解对羟基苯甲酸微生物的比例     液态的    对羟基苯甲酸   选择培养基

(4)能分解对羟基苯甲酸的微生物

(5)对照   实验   说明通过富集培养的确得到了目标微生物

(6)接种环在火焰上灼烧灭菌,烧红的接种环在空气中冷却,同时打开皿盖挑取菌落接种到试管中,并塞好棉塞,接种环在火焰上灼烧,杀灭残留物

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在现代农业中,常在饲料中加入一定量的尿素去饲养牛等牲畜。因其有特殊的器官——瘤胃,在瘤胃中生活着多种微生物,其中许多微生物以尿素作为唯一氮源。某一同学设计了如下实验,对能分解尿素的细菌进行分离和计数。

Ⅰ.取样:到屠宰场,在刚宰杀的牛的瘤胃中取样,将样品装入事先准备好的信封中密封。

Ⅱ.制备培养基:制备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。将菌液稀释相同的倍数,分别接种到牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基上,结果在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数。由于初次实验,选择了一个较宽的稀释范围。并且每个稀释度下需要3个选择培养基,1个牛肉膏蛋白胨培养基。

Ⅲ.微生物的培养与观察:按稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。将涂布好的培养皿放在30℃下培养,并且需要无氧条件。比较两种培养基中菌落的数量、形态等,并做好记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红指示剂的培养基中,观察是否产生颜色反应。

Ⅳ,细菌的计数:当菌落数目稳定时,选取平板计数。请回答下列问题:

(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的目的是_____________________________。

(2)每个稀释度下需要3个选择培养基的目的是______________________。

(3)上述培养时,需要无氧条件的原因是___________________________。

(4)含酚红的培养基应用的目的是_________,结果会呈现的颜色反应是_______,原理是_____________。

正确答案

(1)作为对照,用来判断选择培养基是否起到了选择作用

(2)作为重复组,以增强实验结果的说服力与准确性

(3)瘤胃中的微生物多为厌氧菌,接触空气会死亡

(4)作为鉴别培养基,看是否有分解尿素的细菌存在   指示剂将变红   分解尿素的细菌产生脲酶,催化下列反应:。因产生NH3,使培养基pH升高,酚红指示剂呈红色反应

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从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是:采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从________环境采集。

(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件,使其群落中的数量大大增加,从而分离出所需微生物的培养方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择_______________的培养基,并在____________条件下培养。

(3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解,请分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是___________,获得图B 效果的接种方法是_____________。

(4)配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行___________,接种前要进行______,在整个微生物的分离和培养中,一定要注意在________条件下进行。

正确答案

(1)海滩等高盐

(2)以淀粉为唯一碳源;高温

(3)稀释涂布平板法;平板划线法

(4)pH调整;高压蒸汽灭菌;无菌

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氯苯化合物是重要的有机化工原料,因其不易降解,会污染环境。某研究小组依照下列实验方案(如图1)筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如下表。

(1)配制Ⅱ号固体培养基时,除添加Ⅱ号液体培养基成分外,还应添加1%的_____________。

(2)培养基配制时,灭菌与调pH的先后顺序是_______________。

(3)从用途上来说,Ⅰ号培养基和Ⅱ号培养基分别属于__________培养基和___________培养基。在Ⅱ号培养基中,为SP1菌提供氮源的成分是___________。

(4)在营养缺乏或环境恶劣时,SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体,这种休眠体被称为____。

(5)将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的Ⅲ号培养液中培养,得到生长曲线(如图2)。从图2可知,SP1菌在______培养条件下最早停止生长,其原因是__________。

正确答案

(1)琼脂

(2)先调pH、后灭菌

(3)通用选择硝酸铵

(4)芽孢

(5)20mg/L氯苯      碳源最早耗尽

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探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。

实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的含量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下,只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法,可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。

材料用具:农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9mL无菌水的大试管若干。无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温箱。

方法步骤:

(1)倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板,应在___________操作。

(2)制备土壤稀释液。取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中,充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液1mL,转至9mL无菌水的大试管中,依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作,试管口和移液管应在离火焰____cm处。

(3)涂布。按照由107~103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布____个平板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布____个平板。

(4)培养。放入恒温箱内,在适宜温度条件下培养3d~4d。一般每隔____小时统计一次,选取____时的记录作为结果,这样可以防止____。

(5)细菌的计数。当菌落数目稳定时,选取菌落数在___________的平板进行计数。如果测试的平均值为50,则每克样品中的菌落数是___________。(稀释度是105)

(6)预期结果。相同稀释度下,牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数____(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。理由是______________。

正确答案

(1)酒精灯火焰旁

(2)1~2

(3)3     1

(4)24      菌落数目稳定     因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目

(5)30~300     5×107(6)多于      无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存

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